多重免疫荧光检测试剂盒

利用酪酰胺信号放大(TSA，Tyramide signal amplification)技术，酪胺Tyramide与过氧化物酶反应（酪胺在HRP催化H₂0₂下形成共价键结合位点），产生大量的酶促产物，该产物能与周围蛋白的酪氨酸残基共价结合，从而使目标蛋白标记上特异的荧光。

激活的酪胺共价结合酪氨酸残基上和周围感兴趣的表位，然后高温除去该靶标和聚合物-辣根过氧化物酶(hrp)的非共价结合的一抗，而酪胺连接的荧光团则保留在组织上。另一种针对下一个靶蛋白的一抗随后可应用于组织，并通过不同的酪胺酰胺连接的荧光团显示出来，然后根据需要反复进行循环染色和放大，并考虑抗原测定的顺序，以确保最佳的表位检测。使用这种方法可同时检测6-8个靶蛋白。

试剂盒配备实验所需试剂基础上配备HRP多聚合抗兔/鼠二抗，脱蜡修复二合一，DAPI，抗淬灭封片剂二合一，助力高质、高效完成多标多色荧光检测。

产品优势

特异性强，灵敏度高，低背景

Polymer酶标二抗法（HRP多聚合抗兔/鼠二抗）：

该方法采用一段聚合物做为载体链，将该多聚物与二抗结合，因可同时结合不同来源的二抗，不受一抗种属来源的限制，如兔/鼠通用；然后可再标记上多个HRP酶分子，实现特异性强，灵敏度高，低背景

操作简便

Polymer酶标二抗法

与ABC法，SP三步法相比操作简便，无需进行内源性生物素标记。

脱蜡修复二合一

无需通风厨和传统的脱蜡修复缸，将传统的三次二甲苯脱蜡、三到五次梯度乙醇水化和抗原修复整合成一个溶液。

DAPI，抗淬灭封片剂二合一

DAIP与封片整合成了一个溶液。

有效的缩短了操作时间，简化了繁琐的操作步骤。

多色多标同时检测

多种荧光染料标记Tyramide和DAPI一站式配齐

多种荧光染料标记Tyramide染色靶蛋白，DAPI染色细胞核，实现多个指标的多色检测。

不受一抗种属来源的限制

搭配HRP多聚合抗兔/鼠二抗，一抗可来源于兔或者小鼠。

操作步骤

1.将试剂9A（脱蜡修复二合一）工作液放入修复盒中，加热至沸腾。

2.将切片放入沸腾的试剂 9A（脱蜡修复二合一）工作液中（为保证修复液的pH值，不能使用金属切片架），液体完全浸没切片上 的组织。中小火持续加热30min。

3. 将修复盒撤离加热源，自然冷却至室温。

4.取出组织切片放入装有蒸馏水的烧杯中，再用蒸馏水浸洗 5-6 遍。

5.将玻片沥干几秒钟，用滤纸把组织周围的水分擦掉后，滴加试剂B（过氧化物酶封闭缓冲液），室温孵育15 min，PBS冲洗2 min×3次。

6.将玻片沥干几秒钟，用滤纸把组织周围的水分擦掉后，用免疫组化笔将组织圈起来（首尾要闭合，且不能画到组织上），稀释一抗，滴加相应的一抗到组织上，直至完全覆盖组织。室温或37°C 孵育1~2小时，或4°C 湿盒中过夜（后37°C 复温30min），PBS冲洗2min×3次。

7.将玻片沥干几秒钟，用滤纸把组织周围的水分擦掉后，滴加试剂C（ HRP多聚合抗兔/鼠二抗），室温孵育 30 min，PBS冲洗2 min×3次。

8. 加入荧光染料试剂D-5工作液 100ul，10分钟后，PBS冲洗2min×3次。

9. 把切片置于修复盒中，加入试剂F,使用微波炉中档15分钟，PBS冲洗2min×3次。

10. 重复步骤 6-9，中间荧光染料改为试剂D-4，孵育第二支一抗。

11. 重复步骤 6-8，中间荧光染料改为试剂D-6，孵育第三支一抗。

12. 滴一滴试剂G（约30-50ul）在组织切片上，盖上盖玻片，让切片接触封片液，尽量避免气泡,扫描或拍照。

产品案例分享

多色试剂盒产品列表

注：温和型多色试剂盒在抗体剥离时无需加热至沸腾，37℃进行反应即可。